Qu'est-ce que l'empilage?

À moins que le spécimen ne soit parfaitement plat, il est probable que certaines parties de l'image observée ne soient pas nettes, car elles sont loin du plan focal.
La profondeur de champ dépend à la fois de l'objectif utilisé (les objectifs à fort grossissement ont une profondeur de champ plus faible) et du réglage du diaphragme d'ouverture du condenseur. Une faible profondeur de champ n'est pas nécessairement un inconvénient.
En se concentrant uniquement sur les parties de l'échantillon présentant un intérêt, d'autres parties perturbantes situées en dehors du plan de mise au point, telles que la poussière, peuvent être rendues floues. Dans d'autres cas, il est plus souhaitable d'avoir une image d'un spécimen qui est nette en tous points. En particulier, les objets tridimensionnels, tels que les échantillons de roche et les insectes, semblent beaucoup plus spectaculaires si les images sont bien nettes.

Le picorage (Sacking) fait référence à la combinaison de plusieurs micrographies de focus différent, en une seule image dans laquelle toutes les parties sont focalisées. Il est nécessaire de prendre une série d'images en changeant la mise au point de façon continue entre les images. Le programme compare les images consécutives et détermine ensuite quelles parties de chaque image sont mises au point et celles qui ne le sont pas. Il va ensuite combiner les parties focalisées prélevées sur les différentes images en une seule image finale. Le picorage peut être effectué non seulement avec des images prises au microscope, mais également avec des appareils photo numériques équipés d'un objectif macro. Dans ce cas, la caméra est placée à une distance fixe de l'objet et la mise au point est ajustée manuellement pour chaque image. Vous devez être conscient que le recentrage de l'image peut également modifier légèrement le grossissement de l'image. En focalisant un objectif de caméra, les éléments de l'objectif sont éloignés ou dirigés vers le capteur de la caméra. Cela modifie également le grossissement final de l'échantillon et le programme peut avoir des problèmes pour empiler correctement les images. Lorsque vous utilisez des microscopes, ce n’est pas un problème, car la distance entre l’objectif et les échantillons ne change pas.

Les programmes d'empilement gratuits sont Picolay, Combine ZP.